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Jul 25, 2023

オートクレーブの安全マニュアル

Le autoclavi, che utilizzano vapore saturo sotto pressione, sono una delle migliori.

加圧下の飽和蒸気を使用するオートクレーブは、あらゆる形態の微生物を不活化するために実験室で利用できる最も信頼できる方法の 1 つです。 安全性と品質管理を確保するために、潜在的な感染性物質で汚染されたすべての生体危険物質および品目は、使用または廃棄する前に除染する必要があります。 このような品目には、培地、手術器具、実験器具、ガラス製品、鋭利物を含む生物医学廃棄物が含まれますが、これらに限定されません。 蒸気滅菌は、無水物質、可燃性物質、電気機器、放射性物質、またはオートクレーブ処理で損傷する可能性のあるアイテムには推奨されません。

研究室で最も一般的な蒸気滅菌器は重力移動式です。 飽和蒸気は蒸気圧力制御弁によってチャンバーの上部に流入します。 蒸気が入ると、ドレンラインのトラップを通して空気が押し出されます。 空気がすべて排出されると、トラップが閉じます。 あらかじめ設定された温度と圧力に達するまで、オートクレーブ チャンバー内に蒸気が充填され続けます。 一般的なオートクレーブの動作条件は 121 ℃、ゲージ圧 15 ポンド/平方インチ (psig) です。

滅菌手順は 3 つの段階で構成されます。 これらは、オートクレーブの加熱時間、接触時間、および冷却時間です。 温度が平衡に達したら、完全な生物学的不活化を確実にするために、滅菌が必要なすべての表面を少なくとも 20 分間接触させる必要があります。 通常、滅菌手順の加熱時間セクションは、オートクレーブチャンバーが規定の温度まで加熱されるまでの時間です。 したがって、使用する実行時間は、パッケージ全体が 121 ℃で平衡になり、なおかつ負荷に 20 分間の接触時間を与えるのに十分な長さである必要があります。 固体材料のおおよその総実行時間は表 1 に示されています。液体の場合は滅菌にさらに時間がかかります。 液体の実行時間のおおよその目安は、固体材料の場合、所定の重量を滅菌するのに必要な時間の 1.5 ～ 2 倍です。 これらのデータは単一のアイテムに関するものであることに注意してください。 大きな荷物の場合、経験則として、各荷物の間に 6 インチを超えるスペースがある場合、実行時間は最も重い荷物の重量に設定できます。 ただし、アイテム間の距離が 6 インチ未満の場合は 1 つとみなされます。 一例として、研究者が 2 つの生物医学廃棄物の袋 (1 つは 6 ポンド、もう 1 つは 11 ポンド) をオートクレーブ滅菌する場合が考えられます。 オートクレーブが十分に大きく、バッグを 7 インチ離して配置できる場合は、実行時間を 60 分に設定できます。 ただし、バッグの間隔が 6 インチ未満の場合は、蒸気を適切に混合するための十分なスペースがなく、荷重は両方のバッグの合計である 17 ポンドであると考慮する必要があります。 表 1 から、この負荷には 90 分の実行時間が必要であることがわかります。

感染の可能性のある物質はすべて、洗浄、保管、または生物医学廃棄物として廃棄する前に、加圧滅菌する必要があります。 オートクレーブを操作する担当者は、適切な梱包、装填、ラベル貼り付け、操作手順および緊急手順を理解できるように訓練を受けている必要があります。 このトレーニングは、研究室を担当する主任研究者によって文書化される必要もあります。 オートクレーブは高熱と高圧を発生します。 したがって、すべてのユーザーは関連するリスクを理解し、尊重する必要があります。 熱いものを扱うときは、必ずこの目的のために設計された厚手の手袋を着用してください。 サイクルが完了したら、オートクレーブユニットが冷めるまで待ってから開けてください。 次に、後ろに立って、余分な蒸気を逃がすためにゆっくりとドアを閉めます。 一部の古いオートクレーブには熱シールドがほとんど、またはまったくありません。

このような高温の表面についてユーザーに警告する警告標識をオートクレーブの隣に設置し、担当者にこの危険性を思い出させる必要があります。 オートクレーブの隣にボール紙やプラスチック容器などの可燃物、または可燃性液体を積み重ねたり保管したりしないでください。

ほとんどのオートクレーブには、ドアが適切に閉まっていない場合に装置が作動しないようにする安全インターロック システムが装備されています。 ただし、同じ古​​いユニットにはそのような安全機構が組み込まれていない場合があります。 研究室で使用するオートクレーブにインターロック システムがない場合は、プロセスを開始する前にドアが適切に密閉されていることを確認するための特別な予防措置を講じる必要があります。 滅菌プロセス中にドアの周囲から蒸気が漏れる場合は、ドアが適切に密閉されていません。 この場合は、できるだけ安全にシステムをシャットダウンしてください。 ユニットを冷却し、ドアをリセットします。 ドアがしっかりと密閉されていることを確認することに特に注意し、運転を再開してください。 この問題が解決しない場合は、資格のある技術者がユニットを修理する必要があります。

生物医療廃棄物には、普遍的なバイオハザードシンボルを使用してその旨ラベルを付ける必要があり、可能であれば毎日の作業終了までに滅菌する必要があります。 滅菌していない材料をオートクレーブ内に放置したり、オートクレーブ室に一晩放置したりしないでください。 有毒物質、揮発性化学物質、または放射性核種を含む材料をオートクレーブ滅菌しないでください。 このような種類の材料の滅菌が必要な場合は、環境安全衛生部門に連絡する必要があります。

オートクレーブ滅菌するすべての生物医学廃棄物は、まず承認されラベルが貼られたオートクレーブバッグに入れる必要があります。 針やメスなどの鋭利物は、滅菌する前に、承認され、ラベルが貼られ、隆起のある鋭利物容器に入れる必要があります。 鋭利なピペットや割れたガラスをバッグに入れないでください。 これらの廃棄物は、箱またはバケツに入れてオートクレーブ滅菌するか、10% 次亜塩素酸ナトリウムなどの液体滅菌剤を使用して滅菌する必要があります。 オートクレーブで滅菌される生物医学廃棄物には、廃棄前にオートクレーブ処理されたことを示すインジケーターが必要です。 多くのオートクレーブバッグには、滅菌サイクルが完了すると「オートクレーブ済み」という文字が表示されるインジケーターが付属しています。 このようなバッグは、EH&S を通じて調査員に無料で提供されます。 箱やペールは、オートクレーブ処理してゴミ箱に廃棄する前に、インジケーターを塗布する必要があります。 感染性の可能性のある廃棄物には「BIOHAZARD」とラベルを付け、容器にバイオハザードラベルを貼付する必要があります。 研究動物の必需品、培地、無菌環境で使用される実験器具などの非危険物を滅菌する場合は、無地のマークのない容器で十分です。

バッグ内での蒸気の生成を促進するために、開始前に約 50 ml ～ 100 ml の水をオートクレーブバッグに入れておく必要があります。 この水が負荷内で自然に発生する場合は、水を追加する必要はありません。 オートクレーブバッグは、バッグが倒れた場合にこぼれないようにラップする必要があります。 ただし、テープをきつく巻きすぎると、バッグ内に蒸気の圧力が高まり、バッグが破れる可能性があります。 袋を二重に捨てないでください。 オートクレーブ用バッグは蒸気を透過するように設計されていますが、バッグを二重にするとバッグを通る蒸気の流れが遅くなります。 蒸気の循環が悪く滅菌プロセスに支障をきたす可能性があるため、バッグやオートクレーブユニットに詰め込みすぎないでください。 バッグをオートクレーブに直接入れないことをお勧めします。 ステンレス鋼またはポリプロピレンのトレイに置く必要があります。 ステンレス鋼のトレイはポリプロピレンよりもはるかに効率的に熱を伝導するため、滅菌プロセスが強化されます。

液体をオートクレーブ滅菌する場合は、容器の容量の 75% を超えて充填しないでください。 これにより、流体が加熱されたときに膨張する余地が確保されます。 蒸気による液体の滅菌には問題が生じる可能性があるため、可能であれば廃液を化学薬品を使用して滅菌することが最善です。 研究者が液体の滅菌に蒸気を使用することを選択した場合、液体を収容する容器はオートクレーブ条件に耐えることができなければなりません。 Kimax や Pyrex などのホウケイ酸ガラス、またはポリプロピレン容器を使用できます。 プロセス中に圧力が上昇するように、必ず容器のキャップを緩めてください。 オートクレーブ処理中は、必ず緩んだガラス製品や液体容器を二次容器の中に入れてください。 オートクレーブから液体を除去するときは、厚手の耐熱手袋、スプラッシュゴーグル、ゴムエプロンを着用してください。 液体負荷の場合、オートクレーブの排気サイクルは非常に遅く設定する必要があります。 これにより、圧力が下がっても液体が沸騰しないように、液体が 100 °C 以下に冷却される時間が確保されます。 実行が完了したら、ドアをゆっくりと開き、蒸気が消えるまで立ち上がってください。

滅菌サイクルのパラメーターは、材料の量と種類によって異なります。 表 1 に示す時間は、従うべき良いガイドラインです。 サイクルタイムは最悪のシナリオを想定して作成する必要があります。 密度の高い荷重は、同じ重量の密度の低い荷重よりも時間がかかります。 正確な操作手順は、オートクレーブの各モデルとさまざまな負荷によって異なります。 したがって、責任のあるユーザーは、蒸気滅菌操作の完全な標準操作手順 (SOP) を作成する必要があります。 この SOP には、オートクレーブ滅菌する各タイプの負荷の滅菌手順を含める必要があります。

各オートクレーブ負荷をオートクレーブ ログに記録することが賢明です。 このログには、積載の種類 (培地、廃棄物、動物必需品など)、量、実行プログラム、日付、時刻、およびオペレーターの名前が含まれている必要があります。 グラフやプリントアウトしたストリップをオートクレーブ操作の記録としてログブックに保管します。

各オートクレーブユニットには、オートクレーブ胞子検査手順を含む予防保守が必要であり、資格のある修理技術者による予防保守スケジュールに組み込まれている必要があります。 毎年検査する必要があります。 サービス技術者は、ユニットが安全かつ適切に動作することを保証します。 問題をできるだけ早く解決できるよう、問題が発生した場合は保守請負業者に直接報告してください。 責任あるオペレーターの予防保守には、該当する場合は週に 1 回のドレン ストレーナーの取り外しと清掃、および残留物の蓄積や摩耗がないかオートクレーブのガスケット、ドア、棚、および壁を毎月目視検査することが含まれます。 問題や劣化が見つかった場合は、できるだけ早く修復する必要があります。

オートクレーブを使用するすべての研究室で品質管理監視プログラムが導入されていない限り、誤った安心感が蔓延する可能性があります。 滅菌されるすべての生物医学廃棄物には、目に見えるインジケーターを使用する必要があります。 すべてのオートクレーブの実行には、オートクレーブテープなどのインジケーターを含めることが賢明です。 さらに、ワショー郡は、すべてのオートクレーブに生物学的指標を使用してテストし、毎月記録することを義務付けています。 文書化されたテスト結果は少なくとも 1 年間保存する必要があります。 生物学的インジケーターでは、オートクレーブ処理中の効果的な殺菌をテストするための対照として耐熱性バチルス ステアロサーモフィラス胞子を使用します。 胞子バイアルは、実行中に医療廃棄物バッグ内の困難な場所に配置されます。 マイナスの増加は、オートクレーブが適切に機能していることを示します。 テスターがプラスの増殖を示した場合は、新しいバイアルを使用して分析を再試行してください。 一貫したプラスの増加は、オートクレーブの使用を継続する前に修復する必要がある問題を示しています。

オートクレーブは蒸気滅菌に効果的な器具ですが、適切にメンテナンスする必要があり、すべてのユーザーは適切な使用方法とオートクレーブ使用中の危険性の認識について訓練を受けなければなりません。 滅菌についてご質問がある場合は、Chet Carpenter ([email protected] または (775) 784-4342) までお問い合わせください。